普鲁卡因的LD50测定
[实验目的] 通过实验，学习测定药物LD50的方法、步骤和计算方法，了解急性毒性试验的常规方法。
[实验材料] 小鼠、注射器、普鲁卡因溶液等。
[实验方法]
1、预试验 取小鼠8～10只，以2只为一组分成4～5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围（至少应找出引起20%～80%死亡率）。（参考剂量：LD100为250mg/kg, LD 0为 164mg/kg）。
2、正式试验 在预初验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般选4～5个剂量），每组10只小鼠，动物的体重和性别要均匀分配，完成动物分组和剂量计算后按腹腔注射给药。
3、LD50测定中应观察纪录的项目
⑴ 实验要素：实验题目，实验日期，药物的批号，动物品系，来源，性别，体重，给药方式及剂量、给药时间等。
⑵ 给药后各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，末只死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。
⑶ 尸解及病理切片：对死亡的小鼠及时进行尸解，观察内脏的变化（心、肝、脾、肺、肾），记录病变情况。若肉眼可见变化时则需进行病理检查。观察结束时对全部存活动物称体重，尸解，同样观察内脏病变与中毒死亡鼠比较。当发现有病变时同样进行病理检查，以比较中毒后病理变化及恢复情况。
[结果计算]
实验完毕后，清点各组死亡鼠数和算出死亡率（P），按改良寇氏法公式进行计算：
LD50= ㏒-1[Xm –i (∑P – 0.5)]
其中：
X：最大剂量的对数值m
i ：相邻两组剂量对数值之差
P：各组动物死亡率，用小数表示（如死亡率为80％应写成0.80）
∑P：各组动物死亡率之总和
[报告要点]
将实验资料填入下表，并按公式计算。
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组别 动物数 剂量 对数剂量 动物死亡数 死亡率 LD50
（只） （g/kg） （X） （只） （%）
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1
2
3
……
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[注意事项]
1、 正式试验选用的几个剂量应按等比级数增减。进行正式实验时最好从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物的反应来判断两端的剂量是否合适，否则随时调整。
从求得的LD 0及计算各剂量组的LD 100公比：
公比 r =
b —— 死亡率接近90% 或100% 的剂量
a —— 死亡率接近 5% 或 10% 的剂量
n —— 分组数
2、 供各组动物注射用的药液最好为按剂量比例稀释成的一系列浓度的溶液，使各组动物单位体重的给药ml 一致。
[讨论题]
什么叫LD50？测定LD50的意义和根据是什么？
测定LD50时为什么要记录各种中毒现象及时间过程，而不能只记录死亡只数？
